シリマリン抽出プロセス
シリマリン、多くの薬理学的活性を示すフラボノリグナンの混合物は、オオアザミ（Silybum marianum L. Gaertner）の果実から得られます。 アザミ果実の脂質含有量が高いため、ヨーロッパ薬局方はその抽出の2段階のプロセスを推奨しています。 まず、n-ヘキサンを使用して果物を6時間脱脂します。 次に、シリマリンをメタノールでさらに5時間抽出します。
提示されたデータは、この非常に長い従来のソックスレー抽出プロセスが、加圧液体抽出（PLE）を使用して数分に短縮できることを示しています。 PLEを使用すると、従来の手順で必要な脱脂段階を排除できるため、シリマリン抽出手順が簡素化され、脱脂によるシリマリンの損失が防止されます。 最適化された抽出条件下で得られたPLE回収率は、薬局方推奨のソックスレー抽出手順で得られた回収率よりも明らかに優れています。
アセトン中のシリクリスチン、シリジアニン、シリビンA、シリビンB、イソシリビンA、およびイソシリビンBのPLE収量は、それぞれ、脱脂されていない果実の3.3、6.9、3.3、5.1、2.6、および1.5 mg / gです。 脱脂果実をメタノールで5時間ソックスレー抽出すると、125°Cで10分間のPLEで得られたシリマリン量の約72％しか得られません。
オオアザミとは何ですか？
Silybum marianum L. Gaertner、通称オオアザミ、祝福されたミルクシスル、マリアンシスル、メアリーシスルまたはセントメアリーGG＃39; sシスルは、キク科の一年生または半年ごとの植物です。 もともと南ヨーロッパとアジアで育ったこの植物は、今では世界中で見られます（1）。 この厄介な雑草は現在薬用植物として栽培されており、ヨーロッパで最も重要な薬用作物の1つです。
オオアザミは2000年以上にわたって医療目的で使用されており、最も一般的には肝疾患（肝硬変および肝炎）の治療、および毒性物質からの肝臓の保護に使用されています（2–5）。 この植物に対する最近の研究の関心は、その非常に高い抗腫瘍活性を示す研究によって刺激されています。 植物からの抽出物は、現在、癌の実験的化学的予防および化学療法の副作用の改善において集中的に研究されています（6）。 最近の報告によると、この植物からの抽出物は、抗炎症作用や抗線維化作用など、他の多くの薬理作用によっても特徴づけられます（2、7、8）。
多くの薬理活性を示すフラボノリグナンの混合物であるシリマリンは、オオアザミ（Silybum marianum L. Gaertner）の種子から得られます。 シリマリン抽出にこれまで使用されてきた一般的な手順は、主に低速の高温溶媒抽出法に基づいています。 これらの技術に関連する欠点は、さらに改善できる新しい代替抽出プロセスの探索につながりました。シリマリン抽出物品質。 後者は、シリマリンの適用に関して特に重要です。 得られたシリマリン抽出物は、実際、消費者の受容性を満たすために除去する必要がある有毒な有機残留物を含む可能性があります。
シリマリン抽出のプロセスを改善し、より効果的で環境にやさしいものにするために、最近ではマイクロ波支援溶媒抽出、超音波支援溶媒抽出、加圧液抽出、酵素支援抽出、超臨界流体抽出、特に亜臨界水抽出加圧熱水抽出法としても知られ、開発され、適用されてきました。
材料および方法
植物材料
S. marianum L. Gaertnerのドライフルーツは、2011年秋に地元の薬局（ポーランド、ルブリン）から購入しました。植物材料の十分な大きさの代表的なサンプル（約500 g）を粉砕し、ふるいにかけて粒子サイズ0.4にしました。んん。 材料の正確に秤量された部分が抽出に使用されました。
材料と試薬
標準として適用された、マリアアザミL.ガートナーとシリビンBの標準化された乾燥抽出物（純度98％）は、ポーランドのSigma-Aldrichから購入しました。 アセトン、酢酸エチル、リン酸、n-ヘキサン（すべて分析試薬グレード）およびメタノール（分析試薬グレードおよびHPLCグレード）は、ポーランド化学プラント（POCh、グリヴィツェ、ポーランド）から購入しました。 Millipore（Millipore、Bedford、MA、USA）のMilli-Qシステムを使用して水を精製しました。 地元のガラス工場からの贈り物として入手した中性ガラス（画分0.4〜0.6 mm）を、PLEセルの分散剤として使用しました。
加圧液体抽出
PLEは、Dionex ASE200機器（Dionex Corp.、米国カリフォルニア州サニーベール）を使用して実行しました。 植物材料（0.5 g）を不活性材料（中性ガラス）と混合し、底に濾紙を含む22mLのステンレス鋼抽出セルに入れました。 濾紙の別の円が抽出セルの上部に配置されました。 最後に、セルをしっかりと閉じて、加熱オーブンに入れました。
セルの内容物は、60バールの操作圧力で抽出されました。 プロセスの最後に、抽出されたサンプルは、抽出セルの60％に等しい溶媒量を使用してフラッシュされました。 最後に、加圧窒素（150 psi。）を適用してサンプルを60秒間パージし、抽出物をテフロンコーティングされたゴムキャップ付きの60mLガラスバイアルに収集しました。 収集された抽出物の量は、抽出セルの充填密度に応じて、25〜31mLでした。 得られた抽出物を50mLメスフラスコに移し、適切な溶媒タイプを使用してその容量まで充填しました。 同じ条件下で3回の独立した抽出を実行しました。 分析の合間に、システムを適切な抽出溶媒で洗浄しました。
調査中のPLEパラメータは、溶媒の種類（メタノール、アセトン、酢酸エチル）、温度（50、75、100、125、150°C）、時間（5、10、15、20分）、抽出サイクル数（1 –5）。 PLE脱脂プロセスでは、n-ヘキサンを溶媒として適用し、調査中のパラメーターは温度（50および100°C）および脂質除去の時間（5および10分）でした。 アセトンおよび酢酸エチル抽出物を真空下で蒸発乾固し、クロマトグラフィー分析の前にメタノールに再溶解しました。
ソックスレー抽出
ソックスレー抽出器での徹底的な抽出は、材料の2.0g部分を使用して実行されました。 正確に秤量したサンプルを紙の指ぬきに移しました。 ロードされたシンブルは、100mLのソックスレー抽出器に挿入されました。 抽出は2段階のプロセスで実行されました（n=3）。 手順の最初のステップでは、75mLのn-ヘキサンを使用して植物材料を6時間脱脂しました。 2番目に、シリマリンを75mLのメタノールで5時間抽出しました。 室温まで冷却した後、得られた抽出物を100 mLメスフラスコに移し、その後、その容量までメタノールで満たしました。 3つの独立した抽出が実行されました。
抽出物のクロマトグラフィー分析
HPLC測定は、10μLのサンプルループを備えたPEEK自動注入バルブを含むクロマトグラフィーエンクロージャー（LC20）、グラジエントポンプ（GP50）、吸光度検出器（AD25）で構成されるDionex Liquid Chromatograph（Dionex Corp.）で実行しました。フォトダイオードアレイ検出器（PDA100）。 クロマトグラフィーシステム全体は、PeakNet6データ収集システムの制御下にありました。 クロマトグラフィーによる分離は、Prodigy ODS-2カラム（5μm、250×4.6 mm、ID）（Phenomenex、米国カリフォルニア州トーランス）を使用して40°Cで実施しました。 移動相Aは、メタノールと、100 mLの溶液（35：65、v / v）に0.5 mLの75％リン酸を含むリン酸水溶液との混合物でした。 移動相Bは、メタノールと、100 mLの溶液（50：50、v / v）に0.5 mLの75％リン酸を含むリン酸水溶液との混合物でした。 流速は0.8mL /分でした。 分析は、A中のBのパーセンテージを次のように変化させて移動相グラジエントで実行しました。初期濃度、0％B。 28分、100％B; 35分、100％B、36分0％B。 次の分析の前に、0％Bを含む移動相を使用してカラムを20分間平衡化しました。 各抽出物を3回HPLC分析しました。 フラボノリグナンを検出するための波長は288nmに設定され、210〜500nmのUV-Visスペクトルもピーク特性評価のために記録されました。
抽出物の定性分析は、標準化された乾燥シリマリンサンプルのピークの保持時間と抽出物のUV-Visスペクトルを比較することによって実行されました。 標準化された乾燥シリマリン溶液を調製するために、5.0mgのシリビンA + Bを含むサンプルの0.02g部分を50mLのメタノールに溶解しました。 シリクリスチン、シリジアニン、シリビンA、シリビンB、イソシリビンA、およびBのピークは、それぞれ15.1、17.4、27.5、29.1、33.6、および34.8分の保持時間で現れました。 定量分析はシリビンB標準に基づいており、外部標準法を使用しました。 検量線は、0.1〜1.0 mg / mLの濃度範囲の化合物の5つの濃度から作成されました。 標準溶液の各濃度のピーク面積を3回測定しました。 得られた検量線の特徴的なパラメータは次のとおりでした：傾き0.516および切片0.003。 検量線は、テストした濃度範囲で直線的であることがわかりました。 相関係数はGGgt; 0.995であることがわかりました。 シリクリスチン、シリジアニン、シリビンA、イソシリビンAおよびB標準の購入が難しいため、これらの化合物の量は、クロマトグラフィー応答をシリビンBの検量線に関連付けることによって計算されました。
統計分析
すべてのデータは、平均±標準偏差（SD）として表されます。 分散分析（ANOVA）とF検定を使用して、PLE条件がシリマリン収量に及ぼす影響を評価しました。 比較されたパラメーターの結果がP=0.05の有意水準で異なる場合、平均値は有意に異なると見なされました。 各フィッシャー係数の有意性を確認するために、P値が使用されました。
結果
図1aは、S。marianumL. Gaertnerの果実から得られたPLE抽出物の典型的なクロマトグラムを示し、図1bは、S。marianumL. Gaertnerの標準化された乾燥抽出物をメタノールに溶解して調製したミルクシスル溶液からのシリマリン抽出物のクロマトグラムを示しています（1 mg / mL）。 PLEまたはソックスレー抽出器のクロマトグラムを標準溶液のクロマトグラム（保持時間、UV-Visスペクトル、ピーク純度指数）で分析すると、適用されたクロマトグラフィー条件により、1〜6の番号が付けられたピークの化合物を十分に分離できることが証明されました。サンプルマトリックス成分から。 ピークは、それぞれ（1）シリクリスチン、（2）シリジアニン、（3）シリビンA、（4）シリビンB、（5）イソシリビンA、および（6）イソシリビンBとして識別されました。
オオアザミの抽出方法は？
ほとんどのハーブとは異なり、オオアザミの種は水にあまりよく抽出されないので、それらからお茶を作ろうとしないでください！ 代わりに、挽きたての種を食べるか、良質のカプセルを入手してください。 種を使用する場合は、それらを丸ごと購入し、必要に応じて粉砕します（私はコーヒーグラインダーを使用して粗い粉末にします）。 種は一度に油っぽく、甘く、苦い味がします—おそらくそれらは後天的な味ですが、まったく不快ではありません。 食べ物に大さじ1/2から1杯を振りかけることから始めて、必要に応じて量を調整しながら、それがどのように感じられるかを確認してください。
材料
ぬるま湯1カップ
1カップ100プルーフアルコールウォッカを使用
可能であれば、3/4から1カップのオオアザミの種を挽く
指示
使用中のメイソンジャーを沸騰したお湯に約10分間入れるか、オーブンのラックに約250度で15分間置いて滅菌します。
メイソンジャーにすべての材料を注ぎます。
瓶に新しい蓋を置き、リングでしっかりと所定の位置にねじ込みます。
瓶を約1分間激しく振ってください。
瓶を冷暗所に5週間置きます。
マリアアザミの種が上に浮かないように毎日瓶を振って、アルコールと水を完全に注入します。
指定された週数の終わりに、細かいメッシュのストレーナーを通してミルクシスルを液体から引き離し、液体を保ちます。 細かいメッシュのストレーナーがない場合は、小さなザルを使用するか、ザルにいくつかのコーヒーフィルターを並べて、開口部のサイズを小さくします。
オオアザミが効果を発揮するまでどのくらいかかりますか？
オオアザミの種は、肝臓細胞を有毒な化学物質や薬物から保護する可能性があります。 また、血糖値を下げる、抗酸化作用、抗炎症作用があるようです。
酸化ストレスパラメータの改善は、6か月のGG＃39で一貫して認められました。 特殊なミルクシスルデリバリーシステムによる治療期間（2）。 酸化ストレスパターンの改善は、インスリンシグナル伝達と肝細胞機能の改善に関与しています。
オオアザミはどのくらいの期間服用する必要がありますか？（オオアザミの投与量）
オオアザミは、最大41か月間、分割用量で420 mg /日の経口投与で安全であると考えられています。 ある情報源は、消化不良や胆道系の障害に対してドライフルーツを1日12〜15 g投与することを提案していますが、シリマリンを200〜400 mg /日含む抽出物は、さまざまな肝障害に効果があると考えられています。
オオアザミの利点
1.肝臓の健康をサポートします
オオアザミの最も一般的な用途の1つは、肝臓の問題を治療することです。 2016年の研究では、オオアザミがマウスの食餌誘発性肝障害を改善することがわかりました。 オオアザミが同じように人間の肝臓に利益をもたらすことを証明するには、さらに多くの証拠が必要ですが、研究者はそれが利益をもたらすと理論づけています。 オオアザミの有効成分であるシリマリンは、フリーラジカルの生成を減らすことで抗酸化物質として機能します。 科学者たちは、これが解毒効果を生み出すと考えています。そのため、オオアザミは肝臓の問題に有益である可能性があります。
しかし、さらなる研究が行われるまで、オオアザミは肝臓の問題の主要な治療選択肢として推奨されていません。 しかし、試してみると役立つ補完的な治療になるかもしれません。
2.肌の健康を促進します
ミルクシスルオイルは、皮膚の健康を改善するために局所的に使用される場合があります。
オオアザミは健康な肌を促進するのに役立つかもしれません。 2015年の研究では、オオアザミをマウスの皮膚に塗布すると、炎症性の皮膚状態を改善するのに役立つことがわかりました。
別の研究では、オオアザミは実験室環境で人間の皮膚細胞に抗酸化作用と老化防止作用があることもわかりました。
オオアザミを肌に塗ることでどのような効果が期待できるかを特定するには、人間に関するさらなる研究が必要です。
3.コレステロールを減らします
高コレステロールは心臓の健康に問題を引き起こし、脳卒中の可能性を高める可能性があります。
2006年の研究では、オオアザミがコレステロール値を抑える重要な役割を果たしている可能性があることが示唆されています。 糖尿病を治療するためにオオアザミを服用している人のコレステロール値は、プラセボを服用している人よりも低いことがわかりました。
4.減量をサポートします
2016年に実施された最初の動物実験では、シリマリンが体重増加を引き起こすことを目的とした食餌を与えられたマウスの体重減少を引き起こしたことがわかりました。
これは、オオアザミが体重を減らしたい人にとって有益かもしれないことを示唆しています。 しかし、これを確認するには、オオアザミが人間の体重減少に及ぼす影響についてさらに研究する必要があります。
5.インスリン抵抗性を低下させます
マウスに関する研究では、オオアザミ抽出物がインスリン抵抗性の低下に役立つことがわかりました。 インスリン抵抗性は、2型糖尿病の人々にとって問題です。
この研究は、オオアザミが糖尿病管理に役割を果たす可能性があることを示唆していますが、オオアザミがインスリン抵抗性を低下させ、糖尿病管理をサポートするかどうかを確認するには、さらに研究が必要です。
6.アレルギー性喘息の症状を改善します
オオアザミの有効成分は、炎症を抑えるのに役立ちます。 2012年の研究では、シリマリンがアレルギー性喘息のマウスの気道の炎症から保護するのに役立つことがわかりました。
シリマリンがヒトの喘息症状に役立つかどうかを確認するには、さらに研究が必要です。
7.癌の広がりを制限します
ミルクシスルは、特定の種類の癌の蔓延を防ぐのに役立つ場合があります。 2016年のレビューでは、オオアザミ抽出物が結腸直腸癌の癌細胞の増殖を阻害することがわかりました。
オオアザミが癌との闘いを助けるためにどのように使われるかを決定するために、より多くの研究が必要です。
8.骨の健康をサポートします
ミルクシスルティーは、エストロゲンの不足によって引き起こされる骨量減少を防ぐのに役立つ可能性があります。 オオアザミは、骨の健康をサポートする上で重要な役割を果たす可能性があります。 2013年の研究では、オオアザミが骨量減少の予防に役立つことがわかりました。この研究では、特にエストロゲンの欠乏によって引き起こされる骨量減少に注目しました。 オオアザミが別の原因による骨量減少に等しく有益であるかどうかはまだ明らかではありません。 オオアザミが人間の骨の健康をサポートしていると結論付けるのが安全である前に、さらなる研究が必要です。
9.認知力を向上させます
2015年の研究では、オオアザミが酸化ストレスに対する耐性を高めていることがわかりました。 酸化ストレスはアルツハイマー病の潜在的な原因です。
このように、オオアザミは認知力を改善し、精神に影響を与える変性状態を治療するのに役立つ可能性があります。 オオアザミが認知に及ぼす影響を確認するには、人間に関するさらなる研究が必要です。
10.免疫システムを高めます
オオアザミは、人のGG＃39の免疫応答を強化し、感染と戦うのに役立つ可能性があります。
動物モデルに関する2016年の研究では、オオアザミ抽出物が摂取されたときの免疫力を改善することがわかりました。 以前の研究では、オオアザミ抽出物が人間の免疫応答にプラスの効果があることがわかりました。
科学者がオオアザミが人の免疫システムを高めると確実に言うことができる前に、人間の参加者とのさらなる研究が必要です。
オオアザミの副作用
オオアザミは、数年間服用しても副作用が少ないようです。 一部の人々は、吐き気、下痢、かゆみ、および膨満感を持っています。
バルクミルクシスルパウダーについては、お問い合わせください。herbext@undersun.com.cn
参照：https：//academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
